为什么pcr引物中GC含量过多易出现非特异性条带

2025-05-20 14:23:14

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回答1：

为什么pcr引物中GC含量过多易出现非特异性条带
GC含量高,说明解链温度高,目的条带在较高温度才会解链,而在未达到解链温度时,引物会以未完全解链的DNA为模板,进行PCR非特异性扩增,所以易出现非特异性条带.降低退火温度,DNA复性减缓,增加非特异性互补机会,使非特异性条带增多.
原因有很多：
最重要的可能性是pcr引物的特异性可能不够好
也有可能是退火温度太低
也有可能是buffer中镁离子浓度太高
还有可能是酶量太多，甘油太多，或者酶本身的特异性不太好
当然还有可能是你的目的条带本来就应该有许多条，这个你得根据自己的实验进行具体分析了。